DPPH自由基清除率检测试剂盒(比色法)操作方法

三、自备材料：

1、蒸馏水、无水乙醇

2、实验材料∶植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等

3、研钵或匀浆器或粉碎机或超声破碎机

4、离心机、离心管

5、恒温水浴锅、恒温干燥箱

6、电子天平、30~50目筛

7、分光光度计、比色皿

四、操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品∶

①植物样品∶取新鲜植物样本，清洗干净，研钵研碎(粉碎)，干燥箱烘干后过筛，称取0.05g 样品，加入0.8ml氮自由基提取液，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm离心10min，上清液待用，4℃保存备用(亦可参考相关资料提取方法提取)。

②血浆、血清和尿液样品︰血浆(用肝素或枸橼酸钠抗凝，不宜使用EDTA 抗凝)4°℃5000rpm离心10min，取上清液待用;血清或尿液样品可直接测定。

③细胞样品︰按每5×10°个细胞加入0.8ml氮自由基提取液，超声破碎(功率200W,超声3s，间隔10s，重复30次)，10000rpm 离心10min，取上清液待用。

④果汁、葡萄酒等样品︰按样品∶氮自由基提取液=1∶9的比例震荡混匀，10000rpm离心10min，上清液待用，4℃保存备用。

⑤高活性样品︰如果样品中有效浓度较高，可用提取液进行恰当的稀释。

2、配制维生素C溶液︰将一支10mg维生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中，即成10mg/ml维生素C溶液;可分成0.1ml的小份，-20℃保存。

3、配制Vc标准工作液︰如需测线性关系，建议用氮自由基提取液将10mg/ml维生素C溶液稀释至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc标准工作液;如需清除率约为100%的阳性对照，建议选用大于 30μg/ml 的Vc标准工作液。

4、分光光度计开机预热 30min，调节波长517nm(500~530nm亦可)，无水乙醇调零。

5、DPPH加样∶按照下表设置空白管、样本测定管、样本对照管、阳性对照管，溶液应按照顺序依次加入，混匀，室温避光静置30min。